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關(guān)于熒光定量PCR的應(yīng)用,您都知道多少呢

更新時間:2020-12-07瀏覽:2049次

   關(guān)于熒光定量PCR的應(yīng)用,您都知道多少呢

  熒光定量PCR是在PCR擴增反應(yīng)體系中加入熒光基團,通過實時檢測擴增反應(yīng)中每個周期產(chǎn)物的熒光信號,然后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線定量分析未知模板的方法。以探針法熒光定量為例:在PCR擴增中,加入一對引物,并加入一個特異的熒光探針。探針兩端分別標(biāo)記有報告熒光基團和猝滅熒光基團。
  熒光探針組的熒光信號在擴增開始時被任何一組熒光探針?biāo)钄啵瑹晒庑盘柋粺晒馓结?阻斷,從而使熒光監(jiān)測系統(tǒng)能夠接收到熒光信號,即每個擴增出的DNA鏈中,都有一個熒光分子形成,使熒光信號的積累與PCR產(chǎn)物的形成*同步。

熒光定量PCR

  關(guān)于熒光定量PCR的應(yīng)用分析:
  1、核酸定量分析:對傳染性疾病進行定量定性分析,病原微生物或病毒含量的檢測,轉(zhuǎn)基因動植物基因拷貝數(shù)的檢測,RNAi基因失活率的檢測等。
  2、基因表達差異分析:比較經(jīng)過不同處理樣本之間特定基因的表達差異(如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等),特定基因在不同時相的表達差異以及CDNA芯片或差顯結(jié)果的確證
  3、SNP檢測:檢測單核苷酸多態(tài)性(SNP)對于研究個體對不同疾病的易感性或?qū)μ囟ㄋ幬锏牟煌磻?yīng)具有重要意義。由于SNP的結(jié)構(gòu)簡單,一旦知道SNP的結(jié)構(gòu)和信息量,采用這種技術(shù)進行高通量的SNP檢測將會變得簡單而準(zhǔn)確。
  4、甲基化檢測:甲基化與許多人類疾病有關(guān),尤其是癌癥。DNA在擴增前經(jīng)過處理,使未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶則不受影響。用特異性引物和TaqMan探針區(qū)分甲基化和非甲基化DNA,不僅簡便而且靈敏。
  5、產(chǎn)前診斷:人們不能治療由遺傳物質(zhì)變化引起的遺傳病。到目前為止,我們只能通過產(chǎn)前監(jiān)測來減少病兒的出生,從而預(yù)防各種遺傳病的發(fā)生,從母體外周血中分離胎兒DNA,用實時熒光定量PCR檢測Y性別決定區(qū)基因是一種無創(chuàng)的方法。

 

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